32009D0976Rozhodnutí Komise ze dne 15. prosince 2009 , kterým se mění příloha D směrnice Rady 64/432/EHS, pokud jde o diagnostické testy na enzootickou leukózu skotu (oznámeno pod číslem K(2009) 9951) (Text s významem pro EHP)

a)

antigen: antigen musí obsahovat specifické glykoproteiny viru enzootické leukózy skotu standardizované srovnáním se sérem E05;

b)

testované sérum;

c)

pozitivní kontrolní sérum;

d)

agarové želé:

—

32 μl antigenu,

—

73 μl kontrolního séra,

—

73 μl testovaného séra.

a)

testované sérum je pozitivní, jestliže vytvoří specifickou křivku precipitace s antigenem viru leukózy skotu (BLV), která je totožná s kontrolním sérem;

b)

testované sérum je negativní, jestliže nevytvoří specifickou křivku precipitace s antigenem BLV a jestliže nezakřiví křivku kontrolního séra;

c)

reakci nelze považovat za průkaznou, jestliže:

a)

40 ml 1,6 % agarózy s 0,05 M Tris/HCl pufrem, pH 7,2, v 8,5 % NaCl;

b)

15 ml séra leukózy skotu s protilátkami pouze na glykoproteiny viru leukózy skotu, smíchaného v poměru 1:10 s 0,05 M Tris/HCl pufrem, pH 7,2, v 8,5 % NaCl;

c)

15 ml séra leukózy skotu s protilátkami pouze na glykoproteiny viru leukózy skotu, smíchaného v poměru 1:5 s 0,05 M Tris/HCl pufrem, pH 7,2, v 8,5 % NaCl;

d)

čtyři umělohmotné Petriho misky o průměru 85 mm;

e)

razidlo o průměru 4–6 mm;

f)

referenční antigen;

g)

antigen, který se má standardizovat;

h)

vodní lázeň (56 °C).

a)

Petriho misky 1 a 3:

b)

Petriho misky 2 a 4:

a)

pokus se provede se dvěma ředěními séra (1:5 a 1:10) za účelem dosažení optimální precipitace;

b)

je-li průměr precipitace příliš malý v případě obou ředění, musí být sérum dále ředěno;

c)

je-li průměr precipitace v obou případech příliš velký a neznatelný, musí se vybrat sérum s nižším ředěním;

d)

konečná koncentrace agarózy musí být 0,8 %, koncentrace séra 5 a 10 %;

e)

zaneste naměřené průměry do následujícího souřadnicového systému. Pracovní ředění testovaného antigenu je to ředění, které vykazuje stejný průměr jako referenční antigen.

a)

mikrodestičky pevné fáze, kyvety nebo jiná pevná fáze;

b)

antigen se naváže na pevnou fázi, též pomocí polyklonových nebo monoklonových protilátek. Je-li antigen navázán přímo na pevnou fázi, musí být všechny zkušební vzorky s pozitivní reakcí znovu testovány srovnáním s referenčním antigenem. Referenční antigen by měl být stejný jako testovaný antigen s výjimkou toho, že nejsou přítomny antigeny BVL. Jsou-li protilátky navázány na pevnou fázi, nesmí reagovat s jinými antigeny než antigeny BLV;

c)

testovaná biologická kapalina;

d)

odpovídající pozitivní a negativní kontrola;

e)

konjugát;

f)

substrát přizpůsobený použitému enzymu;

g)

roztok k zastavení reakce, pokud je třeba;

h)

roztoky pro ředění testovaných vzorků, pro přípravu reakčních látek a pro promývání;

i)

odečítací systém vhodný pro použitý substrát.

a)

testy ELISA mohou být používány na vzorku séra a mléka;

b)

pokud se testy ELISA používají pro účely osvědčování v souladu s čl. 6 odst. 2 písm. c) nebo pro stanovení a udržení statusu stáda v souladu s přílohou D kapitolou I, provádí se vkládání vzorků séra nebo mléka do směsi takovým způsobem, aby vzorky odebrané k vyšetření měly nepochybný vztah k jednotlivému zvířeti zahrnutému ve směsném vzorku. Případný potvrzovací test se musí provádět na vzorcích odebraných od jednotlivých zvířat;

c)

používají-li se testy ELISA na směsném vzorku mléka, odebere se tento vzorek z mléka shromážděného ze stáda s nejméně 30 % dojnic v laktaci. Případný potvrzovací test se provádí na vzorcích séra nebo mléka odebraných od jednotlivých zvířat.“